เฮ้ที่นั่น! ในฐานะซัพพลายเออร์ของ FMOC - AIB - AIB - OH TFA ฉันได้ดำน้ำลึกเข้าไปในโลกแห่งการย้อนกลับ - เฟสโครมาโตกราฟีสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ Reverse - เฟสโครมาโตกราฟีเป็นวิธีการไปในกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ แต่การทำให้มันถูกต้องอาจเป็นเรื่องท้าทาย ในบล็อกนี้ฉันจะแบ่งปันเคล็ดลับเกี่ยวกับวิธีเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการนี้
ก่อนอื่นเรามาเข้าใจพื้นฐาน reverse - เฟสโครมาโตกราฟีแยกสารประกอบขึ้นอยู่กับความไม่ชอบน้ำ ในกรณีของ FMOC - เขา - AIB - OH TFA เราต้องการแยกมันออกจากสิ่งสกปรกอื่น ๆ อย่างมีประสิทธิภาพ เฟสคงที่ในการย้อนกลับ - เฟสโครมาโตกราฟีมักจะไม่ชอบน้ำเช่นคอลัมน์ C18 และเฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของตัวทำละลายขั้วโลกเช่นน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์เช่น acetonitrile หรือเมทานอล
การเลือกคอลัมน์ด้านขวา
ตัวเลือกของคอลัมน์เป็นสิ่งสำคัญ สำหรับ FMOC - เขา - AIB - OH TFA คอลัมน์ C18 คุณภาพสูงมักเป็นตัวเลือกที่ยอดเยี่ยม ความยาวและเส้นผ่านศูนย์กลางของคอลัมน์มีความสำคัญเช่นกัน คอลัมน์ที่ยาวขึ้นสามารถให้การแยกที่ดีขึ้น แต่อาจเพิ่มเวลาการวิเคราะห์ ในทางกลับกันคอลัมน์ที่สั้นกว่าสามารถเร่งกระบวนการ แต่อาจเสียสละความละเอียดบางอย่าง
เมื่อฉันเริ่มต้นด้วยการทำให้บริสุทธิ์ FMOC - เขา - AIB - OH TFA ฉันทดลองกับคอลัมน์ C18 ที่แตกต่างกัน บางคอลัมน์มีภาระคาร์บอนที่สูงขึ้นซึ่งหมายความว่าพวกเขาไม่ชอบน้ำมากขึ้น นี่เป็นสิ่งที่ยอดเยี่ยมสำหรับการรักษาสิ่งสกปรกที่ไม่ชอบน้ำมากขึ้น แต่ฉันต้องระวังไม่ให้อยู่ - รักษา fmoc - เขา - aib - โอ้ tfa เอง
อีกสิ่งที่ต้องพิจารณาคือขนาดอนุภาคของการบรรจุคอลัมน์ ขนาดอนุภาคขนาดเล็กโดยทั่วไปมีความละเอียดที่ดีกว่า แต่ยังสามารถเพิ่มแรงดันแบ็คในระบบได้ ดังนั้นคุณต้องค้นหาความสมดุลตามความสามารถของระบบโครมาโตกราฟีของคุณ
การเพิ่มประสิทธิภาพเฟสมือถือ
เฟสมือถือเป็นเหมือน "ผู้ให้บริการ" ที่ย้ายสารประกอบของคุณผ่านคอลัมน์ อัตราส่วนของน้ำต่อตัวทำละลายอินทรีย์เป็นปัจจัยสำคัญ สำหรับ FMOC - เขา - AIB - OH TFA มักใช้การไล่ระดับสีไล่ระดับสี ซึ่งหมายความว่าเริ่มต้นด้วยเปอร์เซ็นต์ของน้ำที่สูงขึ้นและค่อยๆเพิ่มเปอร์เซ็นต์ของตัวทำละลายอินทรีย์
ฉันมักจะเริ่มต้นด้วยเฟสมือถือที่ประมาณ 90% น้ำและ acetonitrile 10% สิ่งนี้จะช่วยให้สิ่งสกปรกขั้วโลกมากขึ้นก่อน เมื่อฉันเพิ่มเปอร์เซ็นต์ acetonitrile, fmoc - ของเขา - AIB - OH TFA เริ่มเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ อัตราที่ฉันเพิ่มเปอร์เซ็นต์ตัวทำละลายอินทรีย์เป็นสิ่งสำคัญ ถ้าฉันเพิ่มมันเร็วเกินไปการแยกอาจไม่ดีพอและ fmoc - เขา - AIB - โอ้ tfa อาจออกมาพร้อมกับสิ่งสกปรกบางอย่าง ถ้าฉันเพิ่มขึ้นช้าเกินไปเวลาการวิเคราะห์จะยาวมาก
ค่า pH ของเฟสมือถือก็มีบทบาทเช่นกัน FMOC - AIB - OH TFA มีกลุ่มการทำงานที่เป็นกรดและพื้นฐานดังนั้นการปรับค่า pH สามารถเปลี่ยนประจุและการชอบน้ำ ฉันมักจะใช้บัฟเฟอร์เช่นบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเพื่อควบคุมค่า pH ค่า pH ประมาณ 2 - 3 มักจะเป็นจุดเริ่มต้นที่ดีเนื่องจากสามารถช่วยโปรโตเนทกลุ่มพื้นฐานและทำให้สารประกอบไม่ชอบน้ำมากขึ้น
การควบคุมอุณหภูมิ
อุณหภูมิอาจส่งผลต่อการแยกในการย้อนกลับ - เฟสโครมาโตกราฟี โดยทั่วไปการเพิ่มอุณหภูมิสามารถลดความหนืดของเฟสเคลื่อนที่ซึ่งอาจนำไปสู่การชะล้างเวลาที่เร็วขึ้น อย่างไรก็ตามมันยังสามารถเปลี่ยนพฤติกรรมการเก็บรักษาของสารประกอบ
สำหรับ FMOC - เขา - AIB - OH TFA ฉันพบว่าอุณหภูมิประมาณ 25 - 30 ° C ทำงานได้ดี ที่อุณหภูมินี้การแยกเป็นสิ่งที่ดีและเวลาการวิเคราะห์ก็สมเหตุสมผล หากอุณหภูมิสูงเกินไปสารประกอบอาจลดลงและหากต่ำเกินไปการแยกอาจไม่ได้มีประสิทธิภาพ
การเตรียมตัวอย่าง
การเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมเป็นสิ่งจำเป็น ฉันมักจะตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ละลาย fmoc - เขา - AIB - OH TFA ตัวอย่างในตัวทำละลายที่เหมาะสม ส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์ที่ใช้ในเฟสมือถือมักเป็นตัวเลือกที่ดี สิ่งนี้ช่วยให้แน่ใจว่าตัวอย่างเข้ากันได้กับเฟสมือถือและสามารถฉีดเข้าไปในระบบโครมาโตกราฟีได้อย่างราบรื่น
ฉันยังกรองตัวอย่างก่อนฉีดเพื่อกำจัดอนุภาคอนุภาคใด ๆ สิ่งนี้สามารถป้องกันการอุดตันของคอลัมน์และป้องกันระบบโครมาโตกราฟี ตัวกรอง 0.22 - ไมครอนมักจะเพียงพอสำหรับจุดประสงค์นี้
การตรวจสอบและการตรวจสอบ
ในระหว่างกระบวนการทำให้บริสุทธิ์สิ่งสำคัญคือการตรวจสอบโครมาโตแกรม ฉันใช้เครื่องตรวจจับ UV เพื่อตรวจสอบการชะล้างของสารประกอบ FMOC - AIB - AIB - OH TFA มีจุดสูงสุดในการดูดซับ UV ที่มีลักษณะเฉพาะซึ่งช่วยให้ฉันสามารถติดตามความคืบหน้าผ่านคอลัมน์
หลังจากการทำให้บริสุทธิ์ฉันตรวจสอบผลลัพธ์ ฉันใช้เทคนิคเช่นมวลสารเพื่อยืนยันตัวตนของ FMOC ที่บริสุทธิ์ - HIS - AIB - OH TFA และโครมาโตกราฟีของเหลวสูง (HPLC) เพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์ หากความบริสุทธิ์ไม่ได้ขึ้นอยู่กับเครื่องหมายฉันจะกลับไปและปรับพารามิเตอร์โครมาโตกราฟี
สารประกอบและลิงก์ที่เกี่ยวข้อง
หากคุณสนใจสารประกอบที่เกี่ยวข้องลองดูOctadecanedioic acid mono - tert - butyl ester-tbuo - เขา - gal (aoe - aoe) - otbue, และfmoc - thr (tbu) - phe - oh- สารประกอบเหล่านี้มีความสำคัญในอุตสาหกรรมยาและอาจเกี่ยวข้องกับการวิจัยหรือการผลิตของคุณ
บทสรุป
การเพิ่มประสิทธิภาพการย้อนกลับ - เฟสโครมาโตกราฟีสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ FMOC - AIB - AIB - OH TFA เป็นกระบวนการที่ต้องใช้ความอดทนและการทดลอง โดยการเลือกคอลัมน์อย่างระมัดระวังเพิ่มประสิทธิภาพเฟสมือถือควบคุมอุณหภูมิการเตรียมตัวอย่างอย่างถูกต้องและการตรวจสอบและตรวจสอบผลลัพธ์คุณสามารถทำให้บริสุทธิ์ที่มีคุณภาพสูง
หากคุณอยู่ในตลาด FMOC - AIB - AIB - OH TFA หรือมีคำถามใด ๆ เกี่ยวกับกระบวนการทำให้บริสุทธิ์อย่าลังเลที่จะเข้าถึงการอภิปรายการจัดซื้อจัดจ้าง เราอยู่ที่นี่เพื่อช่วยให้คุณได้รับสิ่งที่ดีที่สุด - ผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสำหรับความต้องการของคุณ
การอ้างอิง
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010) การพัฒนาวิธีการ HPLC ในทางปฏิบัติ John Wiley & Sons
- McMaster, MC (2006) HPLC สำหรับนักวิทยาศาสตร์เภสัชกรรม Wiley - Interscience